La clonación molecular se utiliza en una amplia variedad de
experimentos biológicos y las aplicaciones prácticas van desde la toma de
huellas dactilares a producción de proteínas a gran escala.
En la práctica, con el fin de amplificar cualquier secuencia
en un organismo vivo, la secuencia a clonar tiene que estar vinculada a un
origen de replicación; que es una secuencia de ADN.
Transfección
Se introduce la secuencia formada dentro de células.
Selección
Finalmente se seleccionan las células que han sido
transfectadas con éxito con el nuevo ADN.
Inicialmente, el ADN de interés necesita ser aislado de un
segmento de ADN de tamaño adecuado. Posteriormente, se da el proceso de
ligación cuando el fragmento amplificado se inserta en un vector de clonación:
El vector se linealiza (ya que es circular), usando enzimas de restricción y a
continuación se incuban en condiciones adecuadas el fragmento de ADN de interés
y el vector con la enzima ADN ligasa.
Tras la ligación del vector con el inserto de interés, se
produce la transfección dentro de las células, para ello las células
transfectadas son cultivadas; este proceso, es el proceso determinante, ya que
es la parte en la que vemos si las células han sido transfectadas exitosamente
o no.
Tendremos que identificar por tanto las células
transfectadas y las no transfectadas, existen vectores de clonación modernos
que incluyen marcadores de resistencia a los antibióticos con los que sólo las
células que han sido transfectadas pueden crecer. Hay otros vectores de
clonación que proporcionan color azul/ blanco cribado. De modo, que la
investigación de las colonias es necesaria para confirmar que la clonación se
ha realizado correctamente.
Clonación celular
Clonar una célula consiste en formar un grupo de ellas a
partir de una sola. En el caso de organismos unicelulares como bacterias y
levaduras, este proceso es muy sencillo, y sólo requiere la inoculación de los
productos adecuados.
Sin embargo, en el caso de cultivos de células en organismos
pluricelulares, la clonación de las células es una tarea difícil, ya que estas
células necesitan unas condiciones del medio muy específicas.
Una técnica útil de cultivo de tejidos utilizada para clonar
distintos linajes de células es el uso de aros de clonación (cilindros).
De acuerdo con esta técnica, una agrupación de células que
han sido expuestas a un agente mutagénico o a un medicamento utilizado para
propiciar la selección se ponen en una alta dilución para crear colonias
aisladas; cada una proviniendo de una sola célula potencialmente y clónicamente
diferenciada.
En una primera etapa de crecimiento, cuando las colonias
tienen sólo unas pocas células; se sumergen aros estériles de poliestireno en
grasa, y se ponen sobre una colonia individual junto con una pequeña cantidad
de tripsina.
Las células que se clonan, se recolectan dentro del aro y se
llevan a un nuevo contenedor para que continúe su crecimiento en forma natural.
opiniones de la iglesia aqui
